抗体选择注意事项

一、一抗选择注意事项

1.       做人的标本时，尽量选择产品编号为ZA-****、ZM-****的常用抗体，尽量避免选择类似SANTA公司既可做人又可以做动物的科研试剂。

2.       货号为ZA-代表兔抗人单/多克隆抗体，ZM-代表小鼠抗人单克隆抗体。

3.       一般情况下，可以做免疫荧光（IF）的试剂均可做冷冻切片免疫组化，但是应该注意冷冻切片的固定方式，如果是经过多聚甲醛灌注或福尔马林后固定的切片，由于醛类固定剂可在蛋白间或蛋白内形成醛甲基，影响抗原的空间构型，进而导致抗原抗体的结合受阻，可能会出现假阴性结果。如果使用石蜡切片进行免疫荧光的检测，由于上述同样的原因和醛类固定后所引起的强自发荧光，所以一般情况下不建议用石蜡切片作免疫荧光。

4.       严格意义上的冷冻切片是指未经多聚甲醛灌注的组织，经多聚甲醛灌注或福尔马林后固定的冷冻切片都会影响抗体与组织中抗原的结合，请注意！

5.       如果客户选择用抗体做细胞样品时，要推荐客户使用浓缩液，因为工作液是针对石蜡切片免疫组化的最佳稀释度，可能并不适用细胞样本。同时，提醒客户必须进行通透（对于细胞核阳性的抗体而言，此步骤尤为重要）。

6.       尽量避免选择小鼠来源的一抗去做大、小鼠的标本。

7.       根据一抗来源选择相匹配的检测系统，例：小鼠单克隆抗体可选PV6002、SP9002。

8.       内源性生物素含量高的组织，如肝、肾等标本，应避免选择生物素/链霉卵白素检测系统（SP试剂盒），应该选择非生物素的polymer检测系统，如PV系列检测试剂盒。

9.       非polymer技术的酶标记二抗不要用于免疫组化的检测，因为其放大作用非常有限，常常导致假阴性结果，例如产品编号是ZB-****的试剂。

10.    动物实验（指大鼠、小鼠、兔、荷兰猪）尽量不要使用通用型检测系统，如果必须要用，首先必须做阴性对照，阴性对照无染色方可使用。

11.    如果标本中抗原含量过低（如磷酸化蛋白及细胞因子等），可能会因为免疫组化方法灵敏度不够，导致出现假阴性结果。这种情况一般可选用灵敏度更高的检测方法，如WB、ELISA等。

二、检测系统的选择

常用检测系统特点介绍：

PV-9000　通用型非生物素polymer检测系统，灵敏度及性价比最高，步骤同三步法，，检测人来源的石蜡切片可优先推荐。

PV-6000　通用型非生物素polymer检测系统，步骤少，操作简单，室温孵育15分钟即可，适合工作量大不计成本的单位，灵敏度不如PV-9000，但基本满足需要，价格较PV9000高。

PV-8000　通用型非生物素polymer检测系统，步骤少，操作简单，为不同厂家的产品，适合工作量大不计成本的单位，灵敏度不如PV-9000，价格较PV9000高。

SP-9000　通用型生物素检测系统，灵敏度较高，三步法，价格低，但在有些组织不太适用（见上），操作步骤较多。

PV-6001/6002　鼠/兔分开的检测系统，需要区分一抗来源，不适合工作量大的科室使用。其最大优点是背景干净，灵敏度不如以上4种。

研究生/科研用检测系统推荐原则：

人的石蜡标本：首选PV9000，因其性价比最高。

做动物标本：一般器官生物素检测系统和非生物素检测系统均可用，根据一抗的不同来源匹配相应的检测系统，如生物素检测系统：SP9001、SP9002、SP9003及非生物素检测系统PV6001、PV6002、PV6003。但当标本为生物素含量较高的肝脏、肾脏、甲状腺等一些组织时，要尽量避免选择生物素检测系统，应选择PV6001、PV6002及PV6003。

三、显色液介绍

1.       HRP标记的检测系统可以选择DAB或AEC显色，DAB阳性染色为棕黄色，AEC阳性染色为红色。注意：AEC可溶于酒精、二甲苯等有机溶剂，所以不能进行脱水、透明，否则会掉色。

2.       AP标记的检测系统，可以选BCIP/NBT（蓝色）显色也可以选择AP-red（红色）显色，但这种两种显色剂都不要用酒精、二甲苯进行脱水透明。

四、各种不同封片剂的用法

1.       中性树胶　病理科最常用的封片剂，适合DAB显色、HE染色、特染等多种染色的封片。

2.       香味封片剂　可用于HE染色、DAB显色等染色方法的切片，用BCIP/NBT显色时，可以将切片吹干后封片，可以长期保存切片。

3.       GVA  水溶性封片剂，适合AEC、AP-red、BCIP/BNT等多种显色剂的染色方法。

4.       Clearmout  可作为各种不同染色方法的封片剂，但其折光性不好，对观察和采图都有一些影响。

5.       Histomount相当于国内的中性树胶。